介绍

代谢物极性和电喷雾电离效率的多样性挑战了单一方法的发展。化学衍生化可以显着改善色谱保留时间和MS响应。我们提出了一个工作流程，包括对胺，苯酚，醛，醇和酮的自动快速平行衍生化，然后进行质量/Quant Swath/MS分析，以进行广泛的代谢物覆盖率。

方法

Dansyl-氯化物（Dancl），Dansyl-Hydrazine（DAN-N2H3）及其13C标记类似物用作衍生物。用12C试剂衍生样品（49种分析物混合物和尿液），而使用PAL RTC AutoSampler（CTC Analytics）将标准标准衍生为13C标记的摄政量。将两个馏分混合并注入到列的列LC系统上。MS采集使用Swath获取在TTOF6600（SCIEX）上进行。

结果

极性代谢物被转化为更多的疏水产物（DANCL和DAN-N2H3衍生物），从而使它们能够在反相液相色谱上分离。两种试剂上基本的P-氨基群的存在将电喷雾反应因子增加10到200倍。原发性醇，苯酚，初级和继发胺通过DANCL和DAN-N2H3衍生化，将酮和醛转化为氢氮酮。自动平行衍生化可以在单个工作流程中可再现的衍生化，包括样品的光标记和在先前样品的LC分析期间，在15分钟内将代谢物混合物的重量标记和重型13C标记。碰撞诱导的解离会生成针对分析物的片段，以及对光和重型分析物和标签（XIC m/z = 171和m/z = 173）的片段。LC-SWATH/MS收集所有前体和所有片段允许筛选尿液中代谢物的相对和绝对定量（n = 45）。

结论

标记的试剂可为胺，苯酚，醛，醇和酮生成足够的标准。发现自动化是复制性的关键，并在线进行了LC分析。在批处理中，样品制备和样品分析被叠加，导致时间大幅增加。发现Dansyl-氯化物和Dansyl-Hydrazine非常适合轻/重标记，改善LC保留，改善MS响应和MS/MS标签。