对表型筛查的兴趣作为小分子的一种手段2021年欧洲杯让球 has continued to increase in recent years. Not too long ago it seemed that the more traditional phenotypic, pharmacologic and physiologic approaches were being neglected as基于目标的方法基因组学开始成为中心舞台。当然，一旦一家制药公司采用了基因组学方法，其他公司似乎都会效仿。在Elrig毒品发现会议上，主持比利时罗马尼亚比分直播人博士内萨·凯里（Nessa Carey）, International Director at PraxisUnico, raised the question: “Where is the next generation of genuinely practical [drug] targets?”

幸运的是，人们对使用的兴趣复兴phenotypic screening作为一个选择进行基于目标的筛选。¹人们对结合表型和基因组数据的潜在益处的好奇心不断增长，以寻求推进小分子药物的发现。比利时罗马尼亚比分直播

Despite there being a lot of emphasis on target-based drug discovery, it hasn’t actually translated into the approval of effective medicines.

这是通过对美国食品药物管理局（FDA）的药物发现策略进行分析的支持，比利时罗马尼亚比分直播得出的结论是，在发现的第一类小分子药物中，与基于目标筛查相比，使用表型筛查确定了更多的数量。²

Identifying drug candidates using phenotypic screening

与基于目标的药物发现相反，表型筛查不依赖于了解特定药物靶比利时罗马尼亚比分直播标的身份或其在疾病中的假设作用。这种方法对基于目标的筛查具有的关键好处是，它的能力捕获了不可实现的复杂生物学机制。³通过确定导致意外活动，毒性和缺乏功效的因素，增加对参与疾病过程的细胞信号网络的理解可以减少临床失败的量。⁴

“关于单个细胞在细胞形态以及其核和其他细胞器的形态中如何出现的信息，从染色中得出的信息，从简单的核染料到免疫细胞化学检测特定蛋白质的信息，甚至是诸如上下文特征，例如如何细胞正在以复杂的方式组织或决定为自己的空间提供一些空间。

表型筛查的两种主要方法

体内assays

These allow direct screening of compounds in preclinical disease models. A drawback is that these models are usually lower-throughput due to their intricacy. Higher-throughput large-scale体内表型筛查已经开发出来，并有可能同时用于同时测试一系列疾病。³尽管在某些情况下，这些可能在商业或道德上不可行。

There is an alternative. Innovative automated phenotypic screening platforms have been developed to mirror the体内环境in vitro设置，最终捕获通常从表演中获得的见解体内测定。⁵具有在高通量自动化时尚中可以筛选出多种人类疾病模型的化合物的能力肯定是“双赢”。安全，功效，⁶效力，毒性⁷动作信息的机理都可以从一个平台生成，以最终确定反映患者生理的系统中的治疗潜力。

基于细胞(in vitro)assays

基于细胞（体外）assays present a significant advantage; namely, these can be easily adapted to a high-throughput format for automated phenotypic analysis.³Although there has been considerable advancement in phenotypic cell-based screening tools there are still challenges associated with this approach. These include validation of ‘hits’ and uncovering the molecular targets of these hits, also known as target deconvolution.^8,9

基于细胞的测定：优点和局限性

小型化：从您的测定中充分利用

There are known barriers to implementing ahigh-throughput approach对于基于细胞的测定，其中包括：成本，细胞的可用性以及执行测定所需的复杂多步骤方法，所有因素都进入了方程式。因此，它引出了一个问题：“如何提高测定法的可伸缩性潜力？”使高通量梦想成为现实。

Adoption of a 1536-well format combats some of these factors, reducing overall cost and improving the efficiency of hit identification. However, implementing 1536-well format plates isn’t always plain sailing, care must be taken to conserve assay data quality and factors such as edge effects (known to deteriorate assay performance in a high-throughput setting) need to be kept in check.^10,11

准确的分配和彻底清洗 - 绝不是唯一的考虑，但重要的是，成功的测定是关键因素。在自动化的环境中，采用准确的分配和彻底的盘式洗涤技术使您可以生成良好，一致质量的测定最终导致优化的筛选结果。分配和吸气时，仔细计算移液器尖端高度是至关重要的。实现一致的抽吸高度的困难意味着在手术结束时可以将多余的液体留在板的底部，留下残留的生长培养基，这会影响细胞活力。¹²或者，抽吸高度离板底部井底太近可能会导致细胞层的干扰。在洗涤上放置另一种“旋转”，一个recent paperCorin Miller等人。用离心取代抽吸，以此作为消除增长媒体的一种手段in vitroreceptor potency assays.¹³这种方法减轻了对移液器提示可能会干扰测定法的担忧。¹⁰

三维组织培养：代表体内功效

与二维（2D）单层培养物相比，三维（3D）组织培养系统的优点是提供更准确的生理环境。尽管有价值，但在基于细胞的筛选中使用的2D细胞培养物具有局限性，因为有限能够反映功效体内环境，这可能导致误导性数据。¹⁴当然，这是一个需要进一步发展和进步的领域，以增加对临床发育进展的化合物的识别。



“组织培养本身有明显的局限性，其中一些（我认为实际上是少数）正在通过3D培养方法来解决。可以通过复杂的显微镜技术获取壮观的图像，并且通常不可能在具有不错的吞吐量的情况下将其转化为可靠的表型筛选。另一方面，分析时更简单的图像可以使自己获得数千个功能，这些功能也不容易摔倒。例如，在不同实验室中完成的实验的可重复性很难掌握实验的可重复性，这是繁琐的计算基础架构，这是主要的工作。”伦敦国王学院HIPSCI细胞表型董事Davide Danovi博士。

表型筛查：我们从这里去哪里？

尽管表型筛查确实具有其局限性，但已经开发了几种方法，可以帮助克服这些挑战并优化其作为成功进行小分子药物发现的成功方法。比利时罗马尼亚比分直播

谨慎和简化测定方案，适应高通量方法，并仔细考虑哪些因素可能影响质量，应有助于最大程度地提高筛选测定的成功，以谨慎和简化测定方案。

It will be interesting to see what impact this resurgence of phenotypic screening has on novel drug discovery, and whether we see an increase in the percentage of new molecular entities identified using phenotypic methods in the coming years.

裁判nces

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