完整的图片,右图 - 代谢组分析的高分辨率质谱
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代谢组学是重要的发现工具许多研究领域,包括药物发现,疾病研究比利时罗马尼亚比分直播和作物工程以及在许多工业应用中,例如生物制造。自信测量的获取取决于准确的代谢物识别和可靠的,正确控制的数据生成,因此有效的方法是关键。
高通量,大规模设置特别容易受到变化的影响。因此,工作流程必须以高准确性和可重复性的方式设计,以确保检测到的变化归因于生物学。将记录的光谱与有效化合物识别的真实标准进行了比较,并且多次质量检查消除了样品制备,操作员和仪器引入的变化。
尽管对靶向代谢物的集中分析是有益且可靠的,但有时需要更广泛的范围来解释表型或探索已知的范围。全面的代谢组覆盖范围 - 样品中所有代谢物的检测 - 提供了范围,但对仪器和设置提出了很高的需求。首先,在样品中区分数百代谢产物需要
现代质谱仪满足了前两个需求,这些要求提供了出色的测量分辨率和分析多功能性,而计划经过精心计划的实验设计满足了第三个。
分辨率,范围和多功能性 - 代谢组见解的三合会
高分辨率,准确的质量(HRAM)MS提供了代谢组分析所需的分辨率,范围和多功能性,并具有自信的识别,准确的定量和从样本到样本进行稳健性能并运行到运行。
根据模型,这些质谱仪可以达到最高分辨率
良好的内部控制的价值
对于代谢组分析,HRAM
控制的选择取决于运行的目标。在代谢组分析的情况下,内部控制应是参考化合物的混合物,以支持鉴定靶代谢物的鉴定,并代表了化学类型,分子量,浓度和离子电荷的光谱。这些控件可作为同位素标记的代谢物混合物商业获得 - 图2说明了常用溶液的覆盖范围。
图2.跨越代谢组:用于代谢组分析的内部控制。学分:Thermo Fisher Scientific
内部控件内部内部内部控件有两个目的。首先,将混合物串行稀释以作为校准剂运行,以获得样品代谢产物的绝对浓度。其次,将标记的代谢物混合物以恒定浓度[样品[样品[样品》中。然后在整个运行序列中测量每个内标的保留时间,质量精度和信号响应,以评估仪器和方法性能。
后者的性能评估测试测试分析工作流程中的损失或错误,以确保仪器和方法产生有效的数据。
HRAM在行动中:并非全部胎牛
血清相同
评估胎牛血清(FBS)批次之间的生化差异,说明了代谢组分析的力量以及良好的内部控制的相关性。FBS通常用作基础细胞培养基中的补充。但是,FBS构成的差异可能导致细胞培养表型和生长速率不一致。为了确定源和处理方法是否与FBS批次之间的生化差异相关,分析了来自五个不同国家的四个不同供应商的20个样本,并在制造过程中对其进行了不同的处理。图3描述了序列运行,包括校准,合并的质量控制样品和测试样品。
图3. FBS研究:样品处理,质量控制(QC)和运行序列设置。学分:Thermo Fisher Scientific
基于图4中汇总的内部控制的交叉传播和交叉注入分析,所使用的方法和HRAM系统的表现非常好。所有注射和跑步的控制显示保留时间(a),质量准确性(b)和信号响应(c)的偏差很小。
测试样品代谢组剖面的主要成分分析聚集的FBS批次,这些批次在制造过程中完全透析除了被热失活或根本没有处理过的批次(图5A)。尽管这些分组没有那么明显(数据未显示),但这些概况也根据原籍国聚集。
通过重现获得的数据,发现尿素在透析的FBS中的浓度较低(图5B)。与其他美国采购的批处理相比,乌里德丁(Uridine)也通过将数据与光谱库匹配与光谱库相匹配,更集中在美国的热灭活FBS中(数据未显示)。
图5. FBS的代谢组分析与获得的数据的复古开采揭示了与加工方法有关的组成差异。学分:Thermo Fisher Scientific
集中精度和全面的广度
通过自信的复合识别和可靠的量化,HRAM系统在代谢物的有针对性分析方面表现出色,并允许数据挖掘发现本来会丢失的新颖见解。这种两倍的分析能力解锁了代谢组以了解生物学过程。已知的代谢产物构成了基础表型的生化途径的第一个支架,而复古挖掘数据则填补了空白并揭示了连接。从代谢组分析中发现的关键是获得代谢组的完整而准确的图片。通过出色的分辨率和灵活的数据获取,HRAM将这些分子种群的重点置于重点。