体内,细胞是高度进化的和复杂的免疫系统的保护。一旦脱离组织,细胞在文化是“自己”。因此,我们必须保护他们,小心无菌技术来防止污染微生物出现在我们周围,包括在实验室。

各种类型的污染存在:例如,细胞可以成为污染的细菌,支原体,或模具。有些是比其他人更难发现¹(如支原体),因此可以产生巨大的影响你的结果在你不知道的情况下。别人会被注意到,将迫使你打断你实验——浪费时间,精力和金钱。污染在实验室可以为科学家是一场噩梦,尤其是当他们可以从一个样本传播其他出现在相同的孵化器或罩。因此每个人都在实验室的一个重要责任尽可能小心,不仅为了自己的实验,也为了其他人的。

防止污染的措施有很多,应该应用在处理。这些措施与经验,成为第二天性,但它仍然可以很容易犯过失错误。在细胞培养领域迈向更高水平的自动化²在一定程度上防止细胞污染,今天我们仍然主要依靠体力劳动,为无菌处理错误带来了许多机会,特别是对初学者。在这里,我们提供了一些重要的提示来维持一个无菌的环境,防止细胞培养污染。

1。戴手套、实验服和使用防护服

这个不用说,你必须提供你的细胞之间的屏障和non-sterile环境那是你实验室(或自己)。使用手套、实验服和帽兜。只使用你的实验服在你的细胞培养实验室,让他们经常清洗。确保你的罩是服务通常保证它正常工作。请注意,有不同类型的帽兜,取决于你想要的保护水平细胞和用户³。

2。正确使用你的罩

罩是不足以确保无菌环境:你必须正确地使用它。首先,确保你没有屏蔽罩内的空气流动:不要将材料放置在空气出口或入口经常发现在板凳上的前后空间内罩。此外,确保你正在罩内,而不是过于接近边缘,以确保你实际上是在无菌条件下操作。你可能想清空你的罩在你的一天,并确保用70%乙醇擦拭或IMS每次使用前后都70%。有些团体选择废物处置本罩内,如果你这样做,经常空和清洁它。别人不愿意和把它罩外的材料或试剂用于很长一段时间内罩可以增加污染的风险。最后,头罩经常有紫外线:开关在结束时,你的一天消毒罩,它没有被使用。

3所示。定期清洁你的孵化器和水浴

一些新孵化器自洁能力——其他人必须手动清洗。经常这样做;该协议将随孵化器。如果使用托盘孵化器内的水,水经常变化。有时你可能需要添加水来防止污染的化学(总是检查这种化学物质是兼容的材料你的托盘是由)。同样,水在你的浴缸,你热身媒体应该定期改变。添加一个水浴治疗每次你改变它。

4所示。喷雾用乙醇或IMS的一切

乙醇是通常用于杀死细菌。确保您使用70%的乙醇与水混合,而不是更低的浓度。水是增加乙醇杀死细菌和病毒的功效。喷你的手套和所有你带罩内的乙醇。重要的是要意识到,每一次你触摸罩外的东西你应该喷你的手套之前将他们罩内。这适用于自动性等可能会忽视你的椅子移动,扔东西以外的罩或触摸你的眼镜。买ethanol-proof标记标签你实验室的器具,否则喷射乙醇/它会删除你的标签。

5。减少接触的细胞non-sterile环境

因为太多的努力致力于维护一个孵化器和罩内无菌环境,确保你最小化时间细胞外的这些环境。例如,当你在显微镜下检查它们,或者当你把他们从孵化器。如果你要使用你的细胞长时间在non-sterile条件下,例如在成像方法,需要将细胞在孵化器,指定一个单独的孵化器为此如果可能的话。这种方式,增加污染的风险将被局限于一个孵化器。

6。买无菌试剂和保持无菌的!

一定要购买无菌试剂。这包括媒体、PBS或任何其他产品,会接触到这些细胞。如果你使用试剂不是无菌的其他工作,如抗体、细胞培养不使用它们。保持两个独立的无菌股票和non-sterile试剂。此外,您也可以选择过滤你的媒体(或任何其他液体试剂)通过膜,去除细菌。通常,0.2μm过滤器是足以阻止细菌。另一种保持你的试剂是整除的不育。这样,如果一个整除会污染整个股票不受影响,你可以扔掉一个整除而不是整个股票。你也可以买pre-aliquoted试剂。

7所示。使用无菌实验室的器具

除了试剂外,您还必须消毒细胞将被接触的实验室的器具。消毒这些,你可以使用一台高压蒸锅机器。不过,确保你的实验室的器具可以热压处理过的!不是所有的材料都能维持高压蒸汽的温度。例如,科学家常常高压釜吸量器,或吸管技巧。如果可以的话,买已经无菌耗材,如烧瓶。保持不育,打开袋只烧瓶一旦喷它,把它罩内。完成后,关闭前袋内罩在外面带回来。如果密封袋用胶带,胶带罩外,双手紧闭袋子直到你带它。你也可以高压灭菌器水,如果你有一个过滤水的来源在您的实验室。 Place a pressure-sensitive tape on the material before placing it in the autoclave: if the material has successfully been autoclaved and sterilized, the tape should change color.

8。经常使用过滤技巧和改变他们

吸管技巧,包含过滤器预防提示从触摸手按移液器内的解决方案。没有过滤技巧,你的手按移液器可以成为污染,因此污染其它示例,它触动第一,这意味着如果一个样本是污染的微生物可以扩散到其他样品,但这也意味着你可以介绍细胞不自觉地从一个样本。出于同样的原因,确保你经常改变你的建议在你的实验中,尤其是在样品之间。当你操作与吸量器小心不要把吸管直接接触别的技巧,如果你改变提示。重要的是,如果你想吸管中的瓶子,避免使用吸量器,必须插入瓶内,防止吸量器直接触摸里面的瓶子:相反,使用吸管枪,可以用于长吸量管,可以达到更深的瓶子里。

9。经常检查你的细胞

尽管一些污染,如支原体,很难检测视觉,它总是明智的定期检查你的细胞在显微镜下。如果你这样做,不要让你的细胞远离孵化器太久污染的风险降到最低。你可以检查移动细菌(不要混淆细胞碎片!),形态变化或不寻常的扩散率。如果你怀疑你的样本被支原体污染,有商业套件可以证实这一点。

10。漂白你的受污染的样品

如果你认为你的样本污染,10%漂白剂,Trigene或氯水池或远离的孵化器。空里面培养容器的水槽和扔掉。如果你意识到你的样本污染,警告你labmates,尤其是那些有样品在相同的孵化器!这是非常重要的,它会让他们快速反应,检查他们的样品都很好,并做相应的计划,如果他们不是。如果可以空所有样本的孵化器,干净的孵化器。

11。使用好的标签实践

保存好记录你的股票的细胞补充和媒体将帮助你更快地确定污染来源。如果你发现一些细胞污染,您应该能够确定这些细胞所属股票和测试是否污染整个股票很常见。同样,如果你知道你使用批媒体或补充,您可以检查或扔掉影响股票以避免重复污染。好的标签还可以防止污染的实验与其他细胞类型:你要确保细胞试验中是你认为的。这是一个大问题,30000的研究使用错误的细胞系⁴。因此,确保你标签的玻璃瓶,瓶,样品之间的交叉污染的可能性降到最低。

12。常识

最后但并非最不重要,常识是很长一段路要防止污染。例如,不执行工作在你的细胞培养实验室细菌或霉菌。不用说,没有包含细菌样本应放置在你的细胞培养孵化器。如果你生病了,尽量避免做细胞培养工作(我们欣赏这并不总是可能的)。最小化在面前打开孵化器或同时工作。不要离开孵化器门太久。细胞培养处理前后洗手!

引用

1。l & Farzaneh Nikfarjam, p .预防和检测支原体污染的细胞培养。细胞J。13日,203 - 12 (2012)。

2。比,D。Riboldi, s。Cioffi, m &马丁,即潜在的生物反应器和瓶颈在3 d细胞培养和组织生产。放置板牙。21,3352 - 3367 (2009)。

3所示。细胞培养污染——热科学。

4所示。Horbach, s p . j . m . & Halffman w·海拉的幽灵:细胞系误认污染科学文献。《公共科学图书馆•综合》12日,硕士论文(2017)。

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