AM: The AAV-MAX system reagents are animal origin free. Why is this important?
EJ: In the gene therapy space, speed to market is hugely important. A key aspect of this is making sure that AAV production systems initially used at the research stage are chosen with clinical and commercial use in mind, including the choice of reagents that are regulatory friendly. The use of animal origin free reagents reduces the risk of viral contaminants as well as reducing batch-to-batch variability.
AM: What regulatory issues do cell and gene therapy developers face? How does the AAV-MAX Production System address these?
EJ: As has been mentioned, the choice of fit-for-purpose and regulatory-friendly reagents ensures a smooth transition to clinical and commercial manufacturing. The AAV-MAX system uses a clonal HEK293 cell line that lacks the T antigen and includes reagents that are all animal origin free. In addition, to complement our currently available research use only (RUO) AAV-MAX system, we will be launching our Gibco™ Cell Therapy Systems (CTS™) version of AAV-MAX next year. Our CTS version provides a documented cell line, GMP-grade reagents, extensive safety testing, and regulatory documentation. Together, these help gene therapy developers to minimize risk and support their regulatory filings.
Emily Jackson-Holmes was speaking to Anna MacDonald, Science Writer for Technology Networks.">
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腺相关病毒（AAV）载体是一种多功能且具有吸引力的基因治疗递送平台，能够靶向多种细胞类型。但是，必须在生活系统中生产AAV，并且迄今为止，具有可扩展性和高生产成本的问题限制了该技术的广泛采用。
捷克葡萄牙直播Thermo Fisher Scientific副产品经理Emily Jackson-Holmes博士艾米丽·杰克逊·霍尔姆斯（Emily Jackson-Holmes），以了解更多有关AAV矢量的好处的信息，以及对使用日益兴趣的原因。在这次采访中，杰克逊·霍尔姆斯（Jackson-Holmes）还解释了GIBCO™AAV-MAX生产系统如何帮助克服与AAV生产相关的挑战并确保法规合规性。
安娜·麦克唐纳（Anna MacDonald）（AM）：为什么对AAV矢量有如此浓厚的兴趣？是什么使它们成为提供基因疗法的理想选择？
艾米丽·杰克逊·霍尔姆斯（EJ）：AAV矢量是基因疗法的一种吸引人，并且广泛追求的选择，这是三种认可的基因疗法（Luxturna，Zolgensma和Glybera*）以及许多正在开发的其他基因疗法证明的。特别是体内基因疗法的递送，出于多种原因使用AAV载体。由于AAV是非整合的，因此优先于慢病毒病毒（LV）体内基因治疗应用，并且免疫原性也很低。另外，不仅可以通过不同的天然发生，合成或杂交血清型来靶向特定的细胞和组织类型。
AM：制造AAV矢量时遇到了哪些主要挑战？
EJ：生产力，成本和可扩展性一直是该领域的主要挑战。在考虑治疗患者大量疾病所需的病毒载体量时，生产力尤其是一个挑战。传统上，对于哺乳动物细胞的AAV生产，使用了基于粘附的HEK293系统。这些需要扩展以扩大产生的病毒矢量的量，这又需要大量的足迹。HEK293细胞的悬架适应能够实施基于悬架的AAV的生产，这更适合缩放。最后，另一个关键挑战是缺乏适合用途和符合法规的试剂，从而使商业化途径。其中的例子包括使用含有致癌SV40大T抗原的细胞以及使用含血清的试剂的细胞，这两者都引起了安全的关注。
AM：最使用了哪种转染方法？瞬时转染的优点是什么？
EJ：产生AAV的最常见方法是HEK293细胞中质粒DNA的短暂转染。特定于无辅助的瞬时转染，将细胞用三种提供REP和CAP基因，转基因和提供辅助病毒功能的基因的质粒转染。使用瞬态转染的关键优势是多功能性和速度。
AM：您能告诉我们更多有关Gibco AAV-MAX生产系统的信息，以及它如何帮助应对AAV生产的挑战？
EJ：AAV-MAX系统是用于AAV生产的完整基于悬架的系统。该系统通过在化学定义的无动物起源培养基中的克隆293F衍生细胞系的高密度悬浮培养物获得高度AAV滴度。使用脂质纳米颗粒转染试剂和新型生产增强剂进行无辅助三次转染。该系统的每个组件都已被优化，可以在简化的工作流程中共同工作，以实现高滴度，从而消除了优化试剂和协议的需求。为了使系统的用户能够轻松从研究用途扩展到临床和商业用途，该系统旨在从奶昔瓶扩展到生物反应器，并且试剂是适合用途和法规的。
AM：AAV-MAX系统试剂无动物起源。为什么这很重要？
EJ：在基因疗法领域，市场速度非常重要。其中一个关键方面是确保最初在研究阶段使用的AAV生产系统会考虑到临床和商业用途，包括选择法规友好的试剂。动物起源的使用不含试剂可降低病毒污染物的风险，并降低批处理变异性。
AM：细胞和基因疗法开发人员面临哪些调节问题？AAV-MAX生产系统如何解决这些问题？
EJ：如前所述，适合用途和调节友好的试剂的选择可确保平稳过渡到临床和商业制造。AAV-MAX系统使用缺乏T抗原的克隆HEK293细胞系，并包含所有无动物起源的试剂。此外，为了补充我们目前仅可用的研究用途（RUO）AAV-MAX系统，我们将于明年推出AAV-MAX的Gibco™细胞疗法系统（CTS™）版本。我们的CTS版本提供了有记录的单元线，GMP级试剂，广泛的安全测试和监管文档。这些共同帮助基因疗法开发人员最大程度地降低风险并支持其监管文件。
艾米丽·杰克逊·霍姆斯（Emily Jackson-Holmes）正在与技术网络科学作家安娜·麦克唐纳（Anna MacDonald）交谈。捷克葡萄牙直播
