高性能液相色谱法的支柱技术之一是分析化学实验室。然而,高度管制的实验室的一个关键挑战是当科学家们必须从一个高效液相色谱系统切换到另一个,或交换方法不同实验室之间和网站。转移的过程方法接收高效液相色谱系统包括检查和调整仪器设置和配置等多个参数。如果不是仔细进行,接收仪器和方法可能产生的结果与原系统一致的分析物的保留时间和峰形状的兴趣,最终呈现分析不可靠。相反,进行方法的调整会导致缺乏符合监管机构的验证分析协议。在本文中,我们审查的主要挑战和方法转移和突出先进高效液相色谱技术如何帮助平滑过渡。

日益增长的方法转移的必要性

有一些场景分析方法可能需要高效液相色谱仪器之间的转移:

1) 方法转移到新设备在同一实验室,也许到另一个供应商或现有的仪器的更新迭代。

2) 传输设备在不同的实验室方法,例如从一个研发实验室质量控制实验室,实验室或赞助合同研究组织。

第二个场景是越来越普遍,因为增加外包给外部实验室,因为方法更频繁地在一个跨多个国际共享网站组织。在许多这样的情况下,色谱仪器并不相同,所以困难出现当科学家试图复制他们的结果。

所有高效液相色谱协议还必须遵守标准化指南分析色谱法由监管机构如世界卫生组织、美国药典(USP621法规)和欧盟良好生产规范的指导方针。这礼物挑战科学家试图调整变量在一定程度上允许监管机构同时确保准确和可再生的分析。

调整方法转移的重要仪器参数

一定的仪器参数影响的程度方法转移过程的成功将取决于特定的应用程序。然而,也有一些因素在所有的高效液相色谱方法是重要的。

许多液相色谱系统不设置提供灵活地调整这些仪器固有参数,转移可以成为耗时、复杂和容易失败。值得庆幸的是,现在可以使用先进的高效液相色谱技术来帮助解决这些挑战包括:

• 列恒温器:不匹配的温度控制可以直接影响分析物的选择性分离。一些现代工具使您能够选择合适的列恒温器模式正确模拟列恒温器模式的传输工具。这是特别感兴趣的终极高性能液相色谱(UHPLC)方法创建流动相之间的摩擦加热和小型固定相粒子在高压力。
• 溶剂温度:除了列恒温器,另一个变量影响温度预热器的使用移动阶段。使成功的方法转移,原系统的预热功能应该尽可能准确地转移。这应该超越简单地决定是否需要包括预热,但也要考虑不同的设计,功能预热器系统的体积。有两种类型的预热,被动和主动。传统的被动加热器工作通过接触表面温度控制在高效液相色谱柱,在预热和热转移。相比之下,更高级的活动预热预柱温度的独立工作,允许用户调整流动相的温度。
• 额外的列卷(ECV):ECV被定义为从注射器探测器体积排除体积的列。如果接收单位ECV较低而原始的工具(例如,从高效液相色谱切换到UHPLC)然后将需要做一些调整,以避免不同分析物分离,特别是对早期当使用强烈的溶剂淋洗物质。同样,一个额外的列卷,太高会导致不足解决组件。这些潜在的问题可以解决先进高效液相色谱技术,允许您自定义注入程序。
• 样品混合效应:不足样品混合喷射器和列条目之间可能发生并导致扭曲的山峰,强劲的样品溶剂(比洗脱液本身)。然而标准操作程序可能不允许修改色谱或样品制备条件来解决这个问题。乐器,一个定制的注射程序或增强的混合样本插头可以允许选择性地调整的有效注入溶剂强度不改变整个实验设置,产生峰值形状一致。
• 细胞体积流动:探测器流细胞体积也考虑在方法转变的关键。用户需要确保卷按照峰值卷(不大于10%的峰值的体积最小峰值)和立柱直径。除了流动单元的物理尺寸,探测器设置起着重要的作用。高效液相色谱软件可以帮助你计算最优设置流动细胞体积,不同乐器之间允许您获得类似的结果。
• 梯度延迟体积(地球村活动):地球村活动描述所有互连组件的体积的混合流动相分离柱的条目。不同的仪器有不同的地球村活动,这可能导致一个特定的溶剂到达不同时间点的列。所有的参数,可以防止转移成功的方法,变量梯度延迟体积是最常见的因素影响结果重现性的新工具。有不同的方法来适应地球村活动,但先进的高效液相色谱仪器包括内置功能,使这些调整更精确和简单的实现。

梯度延迟体积- - - - - -一个更深的潜水

地球村活动本质上是体积之和后点的混合泵,刷新autosampler体积和毛细血管的列头连接。它引起的延迟时间高效液相色谱或UHPLC泵设定生产指定的溶剂组成,当组成到达列。

不同的仪器有不同的组件,地球村活动时可能需要调整方法转移。高效液相色谱系统也可以有不同的抽运技术称为低收入和高压混合泵。一个巨大的地球村活动泵类型之间的区别,但还在一个泵类型,可以在地球村活动造成显著差异。

一个共同的地球村活动测量方法是程序泵提供一个线性梯度从0%到100% B, B通道包含可供化合物,如咖啡因。地球村活动可以计算使用紫外线的时间跟踪达到最高的50%(图1)。

图1:方法测定乐器梯度延迟体积。两种不同乐器的行为以及所示两种常用的数据评估程序(蓝色和绿色箭头)。

地球村活动一旦你知道你的接收仪器,可以确定是否需要更改这个来达到相同的保留时间和峰配置文件为你分析物上生成原始的乐器。修改软件来弥补地球村活动的差异,如通过改变注入的时间或改变梯度剖面,可以提高监管机构的担忧。然而,地球村活动变化允许标准指导下分析化学,所以这些适应流行的工具支持方法转移更成功。

方法调整地球村活动

如果你需要调整地球村活动,常用的有两种方法。第一个选项是地球村活动身体变化的接收系统与原系统的地球村活动。这可能是通过将搅拌机或大量毛细血管泵和autosampler之间。尽管这些变化通常有助于模拟源的参数仪器,搅拌机和毛细血管固定卷,并且不允许精确的地球村活动调整。此外,在监管环境中,这些硬件的变化需要改变的(重新)验证工具。

第二个选择是将注入点相对于梯度的开始。在实践中,这意味着如果地球村活动的差异在接收仪器+ 1毫升,而你的流量1毫升/分钟,你可以注射时间推迟一分钟后该项目已经开始。这样,梯度的斜率和持续时间不会受到影响。虽然这种方法可能是可行的,如果地球村活动的差异是很大的,这种调整可能会在工具之间的差异很小。

为了解决这个问题,现在一些先进高效液相色谱系统特性autosamplers地球村活动可以自由调整。地球村活动而不是手动调整在相当大的增量,与大多数现代高效液相色谱系统,需要一个可调地球村活动允许最终用户逐渐地球村活动和微妙的变化。由此产生的调整不会改变梯度表,从而确保优化方法转移。

软件支持无缝传输方法

所有讨论的参数是一个共同的主题要求用户手动调整复制设置从原来的高效液相色谱系统,可以耗费时间,主观的,容易出错。先进的高效液相色谱系统消除这种需要通过复杂的数据分析软件。

例如,特性,比如次梯度可以支持用户更好的调整注入点达到相同的地球村活动作为他们的原始工具。软件也可以用来优化流等参数单元探测器的响应时间。

此外,今天的先进的高效液相色谱软件可以集中控制所有仪器在一个工作流程,整合不同系统,无论供应商或位置。最先进的高效液相色谱法分析软件提供了预定义的工作流支持新的或有经验的用户在不同的高效液相色谱系统设置复制法,以及集成数据管理过程提供一个即时审核跟踪,确保实验室维护数据的完整性。

结论

增加外包合同研究组织中的组织和不同实验室之间method-sharing意味着科学家通常需要转移不同仪器之间的高效液相色谱方法。如果仔细考虑不是给每个仪器参数的高效液相色谱系统,这可能会导致不能再现的结果。同时,系统的调整,必须遵守监管标准。

许多不同的变量影响的成功方法转移,和调整有多种方法可供选择。创新的高效液相色谱技术可以帮助使方法转移过程顺畅,确保合规通过可调地球村活动等解决方案,可定制的注射和列恒温器模式。此外,当今最先进的高效液相色谱软件不仅能计算最优参数相同的方法在不同的乐器,但也可以集中控制所有工具独立于供应商的方式在不同的实验室。

在一起,这些工具确保用户可以自信地方法每个方法转移时需要移动他们的分析方法不同设备或实验室。