在充满复杂的现代世界中,我们接触到数以百万计的新型污染物。未知的化合物不仅是陌生人分析实验室,也用于检测的仪器。化工仪表不是魔法,需要指导参数与仪器数据与目标化合物。因此,化学家需要确定和优化参数仪器进行分析。

色谱法结合质谱分析检测是一种常见的工具选择。特别是,液体chromatography-tandem质谱(质/ MS)常被用来识别和量化与高灵敏度微量的化学物质。¹

顾名思义,质/女士由液相色谱(LC)和质谱(MS / MS)组件。LC分离目标化合物从样品而女士将它分解成碎片识别和定量。

虽然许多化学家可能长女士熟悉质/常规分析,方法开发与复合优化需要另一组的注意事项和操作。本指南提供了一种简便的参考复合优化与质/女士。

步骤1:稀释的化学标准

如果我们想教一个未知化合物的工具,我们需要一个化学标准是免费的从其他化合物。这是确保复合优化是免费的从干扰引起的其他化学物质出现在我们用于优化的解决方案。因此,一个纯化学标准通常用于优化。根据仪器灵敏度、标准稀释到适当的浓度用适当的溶剂(50 ppb-2 ppm)。这应该能够溶解溶剂化合物而不损害仪器。起动器,解决方案可能是一个混合的未来移动阶段进行分析。

步骤2:MS / MS优化

尽管一个示例包含化合物的混合物首先进入LC隔间,复合优化始于MS / MS。我们从光谱获得的信号是主要MS / MS操作的结果。为了确保我们最后获得的信号是来自我们的目标化合物,而不是别的LC的耗尽,必须首先获得我们的目标化合物的MS / MS参数。

MS / MS隔间分解复合成碎片电离和碰撞。化合物是由碎片的身份。因此,复合优化涉及到指定所需要的能量直接复合探测器的能量碎片。

优化母体离子的电离能

化合物进入第一次舱女士时,它就变成了一个离子(称为父离子)通过电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)。为父离子优化参数,需要知道它的质量。作为一个经验法则,质量通常是其分子量正负质子从原来的分子([M + H]⁺或(mh)^{- - - - - -})。一些有用的资源找到父离子的质量NIST化学WebBook ²和学术期刊文章。一旦父母离子的质量是已知的,可以优化孔的电压。这是通过一系列扫描电压来选择最优值给父离子的最大响应。

在某些情况下的响应较低[M + H]⁺或(mh)^{- - - - - -}。的一个可能原因是,离子形成加合物与流动相添加剂或溶剂。例如,甲酸铵是一种常用的添加剂,可能导致加合物的形成。在这种情况下,一个可以尝试优化质量(M + NH4)⁺。

进入第一个隔间女士后,父离子到达碰撞室。通过与气体分子碰撞,父离子分解成碎片。但什么是碎片

优化碰撞碎片离子的能量

不同的碎片形成不同碰撞能量的应用,进而形成不同的光谱。通过扫描一系列碰撞能量和获得的光谱覆盖,最丰富的片段可以识别(或女儿离子)。每个化合物都有自己的女儿离子的分布特征。质/女士,一个人可以选择多反应监测(MRM)监控几个女儿离子从一个父离子在同一时间。

MRM优化的一个关键参数是碰撞能量。它所需要的能量将父离子分解成特定的女儿离子。通过扫描产生的碰撞能量的最大响应每个女儿离子,可以优化每一对MRM的碰撞能量。

这是一种常见的做法和标准至少有两对MRM每个化合物。第一对通常为量化而第二对确认。优化利用标准以来,第一次和第二次离子对来在一个特定的比率。这个比例还用于确认的化合物。

一种化合物被认为是发现只有:

1. 它既包含MRM对与标准
2. MRM对具有相同比例的标准

因此建议优化至少两个MRM对每个化合物。在某些情况下,女儿离子的质量可能与常用的溶剂,或在样品制备容易受到干扰。它总是有用的优化三个或四个MRM双(如果可能的话),以确保准确性。

步骤3:色谱优化

MS / MS室的优化后,下一步是优化LC条件。

LC分离依赖于化合物的保留由于列(固定相)之间的竞争和流动相(动态阶段)。列选择的物理和化学性质取决于感兴趣的化合物。例如,C18柱通常是用于非极性化合物。总是有用的熟悉列规范³或获得一个列的选择指南列制造商。为流动相、甲醇、乙腈和水或溶剂是常用的混合物。添加酸或盐铵可用于提高分辨率和峰值形状。

在选择一个合适的列和流动相,一个需要优化LC条件包括流量、流动相梯度,列温度。这是确保化合物可以很好地解决峰识别和量化。扭曲的峰值或尾矿可能发生如果信用证条件不适合。例如,尽管更快的流量可能会增加运行的效率,一个流量过高可能会导致几个峰合并在一起。峰加宽因此,如果被观察到,它将有助于减缓流速和检查是否峰值是由于重叠的两个山峰。另一个建议是,修改流动相梯度。一些干扰化合物可能洗提的移动阶段容易由于其溶解度。增加使用的流动相的比例可能会有助于消除这些干扰,产生一个很好的解决高峰为目标化合物。第三个建议是使用统一列温度。虽然大多数信用证可以使用运行在环境条件下,固定列温度可以防止峰值展宽由于列内的温度的不均匀分布。⁴

第四步:验证校准曲线

之前样品制备,重要的是要确认条件对目标化合物进行了优化。验证的一种方法是使用在不同浓度的解决方案,或测试校准曲线。如果响应与化合物浓度比例获得很好的解决高峰,仪器方法应该准备好了。

引用

1. Tuzimski t;Sherma, j .(2015)高效液相色谱法在农药残留分析。CRC的新闻
2. NIST质谱数据中心。从https://chemdata.nist.gov/获取10-10-2018。
3. 多兰,j·w·;莫尔,a;彬格莱,d;Wrisley l;陈,c . c;Angod m;Lunte c;Krisko r;温斯顿·j·m·;家的,b . a; McCalley, D. V.; Snyder, L. R. (2004) Choosing an equivalent replacement column for a reversed-phase liquid chromatographic assay procedure. J. Chromatogr. A 1057, 59–74.
4. 多兰,j . w .(2014)温度的重要性。从http://files.pharmtech.com/alfresco_images/获取医药/ 2014/08/22 c91e07c2 - 9442 - 47 - b5 - b2d1 c9d4f7e635db /文章- 23766。pdf在29-10-2018。