3D细胞培养模型的物理性质和大小可能与塑料表面上的单层生长的细胞大不相同。如果在较大的3D结构中发生不完整的细胞裂解或不完全的试剂渗透，则使用最初设计用于单层的架子商业测定试剂可能会导致伪像。当尝试组合（多重）多种化学化学以询问由3D细胞结构组成的相同样品时，可能会进一步扩大这些问题。我们设计了修改的细胞健康测定法规和方案，以克服测定3D培养模型所遇到的一些问题。我们还测试了使用悬挂液滴法形成的单个球体样本上组合/多路复用的不同测定组合。我们已经将新型的实时细胞活力测定法与：使用DNA结合染料测量细胞死亡，测量萤火虫荧光素酶报道器活性以检测细胞应激事件，并提取RNA以执行基因表达分析。将描述验证每个多重测定组合以及每种方法的优点和缺点所需的参数。